Embrapa Trigo


		Novembro, 2008	94
		Passo Fundo, RS

Sessão de Fitossanidade, Fitotecnia & Solos

DESENVOLVIMENTO DE MARCADORES SSR GENÔMICOS DE MAGNAPORTHE GRISEA DO TRIGO

Bombonatto, E. A. S.^¹; Consoli, L.^²; Bonato, A. L. V.^2*; Maciel, J. L. N.²; Pereira, J. F.^³

O fungo Magnaporthe grisea é o agente etiológico da brusone do trigo, (Triticum aestivum L.) considerada uma das principais patologias dessa cultura no Brasil, especialmente na região dos cerrados. Embora haja grande número de trabalhos com o fungo M. grisea do arroz, são escassos os estudos de variabilidade genética com os isolados de trigo. Dentro deste contexto, destacamos a importância do desenvolvimento de marcadores microssatélites (SSR), que apresentam grande eficiência na detecção de polimorfismo. O objetivo deste trabalho foi a construção de uma biblioteca genômica de M. grisea enriquecida com SSR, de acordo com o protocolo descrito por Vincentz et al. (2007) no curso “Construção de bancos enriquecidos em microssatélites de eucariotos” (UNICAMP), com modificações. A biblioteca foi enriquecida para o motivo de microssatélite [TC]₁₃previamente descrito como sendo o mais abundante em isolados de M. grisea do arroz (GARRIDO, 2001). Após o procedimento de enriquecimento, os fragmentos obtidos foram clonados no vetor pGEM®-T Easy e usados para a transformação de células competentes JM109 (PROMEGA). Foram selecionadas 384 colônias para a extração do DNA plasmidial. Foram realizadas 768 reações de seqüenciamento num volume final de 10µL contendo: qsp 10µL de H₂O; 1X de tampão save money®; 0,32µM do primer M13F ou SP6; 0,5µL de Big Dye® (vs. 3.1) e 100µg do DNA plasmidial. As PCRs foram submetidas ao seguinte programa nos termocicladores GeneAmp® PCR System 9700 (Applied Biosystems) e PTC100 (MJ Research): desnaturação inicial a 96ºC por 1 min, 30 ciclos de 96 ºC por 30seg, 50ºC por 30 seg e 60 ºC por 2 min, com uma rampa de -1ºC/seg entre a desnaturação e o anelamento. Após a amplificação dos fragmentos, as reações foram precipitadas, ressuspendidas em 10 uL de formamida Hi-Di™ e injetadas no seqüenciador ABI3100 Genetic Analyzer (Applied® Biosystems) para a realização da eletroforese. Foram obtidas 768 seqüências brutas que estão em fase de análise de qualidade com o programa STADEN e de verificação da presença de motivos de SSR. As seqüências apresentando microssatélites serão usadas para o desenho de primers específicos visando o desenvolvimento de marcadores para o estudo de diversidade genética de isolados de M. grisea do trigo com virulência caracterizada.

1 Acadêmico do curso de Biomedicina, Universidade Luterana do Brasil. Bolsista PIBIC/CNPq.

2 Pesquisador da Embrapa Trigo, *orientador.

3 Analista da Embrapa Trigo.

Documentos Online Nº 94 Publicações Online