ESTUDOS CITOGENÉTICOS PRELIMINARES SOBRE O EFEITO DE DIFERENTES PRÉ-TRATAMENTOS NA EMBRIOGÊNESE DE MICRÓSPOROS DE CEVADA

Toniazzo, C.¹; Brammer, S.P.²; Scagliusi, S.M.M.³; Teixeira, M.S.⁴; Bortolanza, D.⁵; Borba, C.K.⁶

A cultura de anteras de cevada, através do processo da androgênese, tem sido uma técnica de grande eficiência para a obtenção de plantas haplóides. A observação citológica na androgênese, permite verificar a presença de micrósporos responsivos e relacioná-los com as estruturas embrionárias obtidas. O objetivo do trabalho foi testar dois pré-tratamentos, nas espigas doadoras de anteras, da cultivar de cevada BRS 195 (responsiva à androgênese), e verificar a formação das diferentes estruturas embrionárias. A coleta das espigas foi feita quando os micrósporos atingiram a fase uninucleada. Os pré-tratamentos empregados foram: a) espigas mantidas em placas de Petri, em câmara úmida, por 10 dias a 4 ºC no escuro; b) espigas mantidas em placas de Petri em solução de manitol a 0.3 M (estéril) por 4 dias a 4 ºC no escuro. As coletas de anteras durante os pré-tratamentos foram: Frio: zero dia (FI), dois dias (FII), quatro dias (FIII), seis dias (FIV), oito dias (FV) e dez dias (FVI); Manitol - zero dia (MI), um dia (MII), dois dias (MIII), três dias (MIV) e quatro dias (MV). Após este período, foi feito o plaqueamento das anteras no meio de indução FHG (Lazaridou et al., 2005). Para as análises citogenéticas, foram coletadas 3 anteras do meio de indução a cada dois dias de cultivo in vitro para cada tratamento. As anteras foram fixadas em Carnoy por 24 horas em temperatura ambiente. A técnica citológica empregada foi a de “Squash” e o fluorocromo usado o DAPI. As análises citogenéticas foram realizadas em microscopia de fluorescência. Até o momento, foram analisadas 17.230 células, das quais 8.674 foram dos tratamentos de frio e 8.556 de tratamentos com manitol. As categorias celulares identificadas foram micrósporos vazios, uni, bi, trinucleados, além de estruturas multicelulares. Os resultados preliminares indicaram um maior número de estruturas multicelulares quando empregado o tratamento a frio, embora maiores análises serão necessárias, bem como a repetição do experimento para a conclusão dos resultados e, a partir destes, auxiliar na otimização de metodologias para a produção de plantas duplo-haplóides em larga escala.