No Laboratório de Biotecnologia da Embrapa Trigo, eram utilizados dois métodos de extração de gluteninas: um para as gluteninas de alto peso molecular e outro para as gluteninas de baixo peso molecular.

O primeiro método (A) é uma adaptação, feita na Embrapa Trigo, de diferentes protocolos de extração de proteínas de reserva. Às amostras de farinha obtida a partir da maceração de grãos de trigo, é adicionado tampão de extração (45 mg de farinha/ml de tampão), composto de 0,125M Tris-HCl pH 6,8; 1,3% (p/v) SDS; 8% (v/v) mercaptoetanol; 20% (v/v) glicerol; 0,02% (p/v) Pyronin Y; 1,5 M dimetilformamida. Após homogeneização, as amostras são mantidas a temperatura ambiente por 1 a 2 horas, podendo em seguida serem aplicadas em eletroforese de géis de poliacrilamida na presença de SDS (SDS-PAGE).

O segundo método (B) é baseado em protocolo de Singh et al. (1991), proposto como um procedimento simplificado para separação de subunidades de gluteninas em géis monodimensionais, aplicável em screening de grande número de amostras. Este método baseia-se no princípio de extração sequencial de proteínas de reserva, gliadinas e gluteninas, adaptado de Marchylo et al. (1989). Inicialmente é feita a extração de gliadinas, pela adição à farinha de solução a 50% (v/v) propanol-1 (20 mg farinha/ml). As amostras são homogeneizadas e incubadas a 65 ^oC por 30 minutos. Após centrifugação (10.000 g), o sobrenadante é eliminado e a farinha residual é tratada com 100 uL da segunda solução: 50% (v/v) propanol-1; 0,08M Tris-HCl pH 8,0; 1% (p/v) DTT (agente redutor). Após 5 minutos de centrifugação, adiciona-se ao extrato, 100 uL de 50% (v/v) propanol-1; 0,08M de Tris-HCl pH 8,0 e 1,4% (v/v) de vinilpiridina-4 (agente de alquilação dos grupos sulfidrila das gluteninas).

Ambos os métodos foram comparados quanto ao período de duração da análise e à qualidade dos resultados obtidos, sendo que as amostras utilizadas para a avaliação de ambos os métodos de extração foram grãos de trigo de diferentes cultivares. Os grãos foram macerados individualmente e submetidos aos dois protocolos de extração A e B, descritos anteriormente. Os extratos de gluteninas foram submetidos à SDS-PAGE, seguindo o protocolo descrito por Payne et al. (1981). Após eletroforese, os géis foram corados na presença de Coomassie Blue R250 e G250 conforme Blakesley e Boezi (1977), e, posteriormente fotografados.